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? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）

是酶免疫測(cè)定技術(shù)中應(yīng)用最廣泛的技術(shù)

ELISA Kit的誕生

幫助科研工作者省掉了繁瑣的實(shí)驗(yàn)過(guò)程

提高了科研效率！

選對(duì)試劑盒

配合好的實(shí)驗(yàn)技巧

會(huì)讓實(shí)驗(yàn)效率事半功倍~

那么如何挑選合適的ELISA試劑盒？

↓↓↓今天小鹿就來(lái)告訴你?

1 查找待測(cè)樣本的蛋白濃度范圍

參考數(shù)據(jù)庫(kù)：通過(guò)NCBI、UniProt、Pax-Db等數(shù)據(jù)庫(kù)查找目標(biāo)蛋白的表達(dá)量參考值，確保試劑盒的檢測(cè)范圍與參考值一致。

2 試劑盒的應(yīng)用種屬和檢測(cè)樣本種類

種屬特異性：不同種屬的樣本通常不能通用，除非試劑盒特別說(shuō)明。

樣本類型：常見的樣本類型包括血清、血漿（不同抗凝劑）、細(xì)胞上清和細(xì)胞裂解液，不同樣本可能需要不同的試劑盒，要先確保試劑盒適用于您的樣本類型。

3 試劑盒的檢測(cè)范圍

標(biāo)曲范圍：確保待測(cè)樣本的濃度落在試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)。對(duì)于高濃度樣本，建議先進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)以確定合適的稀釋倍數(shù)。由于樣本之間存在個(gè)體差異，一般建議選擇4個(gè)以上的樣本進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，以確定最佳稀釋倍數(shù)。

4?試劑盒的靈敏度

選擇適合待檢指標(biāo)含量的靈敏度，低含量指標(biāo)需選擇高靈敏度試劑盒。

1 樣本的準(zhǔn)備

新鮮樣本：盡量使用新鮮樣本，避免使用溶血、溶脂、保存時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或凝固不全的樣本。

保存條件：如果不能立即測(cè)定，5天內(nèi)應(yīng)4℃保存，1周后檢測(cè)的樣本應(yīng)低溫凍存，避免反復(fù)凍融。

2 仔細(xì)閱讀說(shuō)明書

熟悉流程：推薦畫出簡(jiǎn)要步驟圖，提前準(zhǔn)備試劑，濃縮試劑提前配制工作液。

批次一致性：不同批次的試劑不要混用，檢查各組分的有效期。

3 預(yù)包被酶標(biāo)板和試劑組份的平衡

室溫平衡：預(yù)包被的酶標(biāo)板條和各試劑組份需室溫平衡30分鐘以上，以確保反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度達(dá)到所需溫度，避免弱陽(yáng)性樣本漏檢。

4 待測(cè)樣本加樣

分批操作：樣本過(guò)多時(shí)建議分批操作，提前做好稀釋。

加樣技巧：控制加樣時(shí)間，避免誤差；垂直加入孔底，避免接觸孔壁；使用一次性移液頭，防止交叉污染。

5 孵育和洗板

孵育條件：根據(jù)說(shuō)明書選擇孵育時(shí)間和溫度，為了避免溫度不均，盡量采用恒溫孵育箱進(jìn)行孵育。

洗板技巧：手工洗板時(shí)垂直拍板，避免交叉污染；洗板機(jī)洗板時(shí)檢查沖洗頭是否通暢。

6 顯色

顯色條件：TMB作為底物反應(yīng)溶液，需要量取所需的量進(jìn)行添加，禁止全部倒出后再將余量倒回，37℃反應(yīng)20分鐘（可酌情縮短或延長(zhǎng)孵育時(shí)間，時(shí)間不超過(guò)30分鐘），顯色反應(yīng)需避光。

7 讀數(shù)和數(shù)據(jù)分析

及時(shí)讀數(shù)：終止反應(yīng)后15分鐘內(nèi)讀取結(jié)果，酶標(biāo)儀需預(yù)熱15-30分鐘，注意選擇合適的波長(zhǎng)進(jìn)行讀數(shù)。